生长与分化 1.无菌材料的获得 选取一年生幼苗生长健；仕无病虫害的母株，切取当年萌发之春梢先端，去除叶片，保留叶柄，将枝条截成2—3cm的小段。消毒时先用10%洗衣粉溶液浸泡15min，然后用流水；中洗30min。在无菌条件下用75%乙醇溶液浸泡杀菌30 S， 用0．1%的升汞溶液加吐温—20杀菌3、5、10、15min。0．1%升汞溶液灭菌效果随杀菌时间延长而提高，杀菌时间少于10min则无菌苗获得率小于13．5%，杀菌15min”无菌苗获得率为23．7%，外植体死亡率达33．3%。随着杀菌时间的延长升汞对植物材料的毒害作用加剧，以0．1%升汞溶液杀菌时间10—15min为宜。用无菌水；中洗3—5遍后，接种到MS固体培养基上。 2.芽的诱导 将接种后20d的无菌苗转移至培养基(1)上，5—7d茎尖开始萌动，10d腋芽萌动，芽逐渐长大，继续培养20d，茎段上所有腋芽均萌发成侧枝。侧枝生长正常，叶片深绿色，茎基部愈伤组织较少，黄绿色。 3.试管苗的增殖 将试管苗侧枝分割成2—3芽为一段，接种于培养基(2)上。10d后茎段叶芽萌动，30d长成大量侧枝，并有大量双生枝和三生枝产生。接种茎段形成具有5—8侧枝的丛生苗，平均增殖5．8倍。试管苗节间明显伸长，幼嫩叶片茎杆均呈淡红色，叶片大，茎杆较粗，组织不充实，茎基部愈伤组织大。以后每30d继代1次，经3—4次继代试管苗出现玻璃化现象。 4.壮苗培养 将经增殖培养的试管苗每继代3—4次后转移至培养基(3)上。40d后形成大量侧枝，平均每茎段4—6侧枝，侧枝平均长1．8cm，平均增殖3．1倍。基本无双生枝或三生枝。侧枝生长健；D，组织充实，叶色深绿，基部愈伤组织小，黄绿色，无玻璃化现象。 5.根的诱导 将生长健壮、长度大于1．2cm的侧枝分割，转移至培养基(4)上。提高光照度至2500—3000lx，延长光照时间至每天16h。培养15d后开始有根原基形成，根原基形成后即可炼苗。20—25d调查生根情况，生根率73%，每苗平均生根l—2条。 6.炼苗移栽 将生根试管苗带瓶移人栽培温室，培养1周。当根长0．5—1 omb寸，打开瓶盖炼苗3—5d，将生根苗取出，洗净根部培养基，栽植于育苗穴盘中。以黑泥碳为基质，温度控制在20—25℃之间，湿度为85%—95%左右，20d即可成活，成活率达73%以上。

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